蔡美艳 叶建人 李程巧 施海萍
摘要：为了明确棚栽嫁接西瓜黄瓜绿斑驳花叶病毒发病地杂草染病情况，采集3个镇（街道）5个村的发病地杂草样本进行种类识别与酶联免疫双抗体夹心（DAS-ELISA）法检测。结果发现82份杂草有18科39种，其中37种杂草78个样本染病，染病率分别为94.8%和95.1%；且在染病的杂草中有12种杂草表现着不同程度的黄瓜绿斑驳花叶病毒疑似症状，以繁缕症状表现最早，也较严重。说明棚栽西瓜田内杂草种类繁多，且很多都能感染或携带黄瓜绿斑驳花叶病毒。
关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒；杂草；染病性
中图分类号：S451文献标志码：A文章编号：1003-935X（2016）02-0058-05
黄瓜绿斑驳花叶病毒（cucumbergreenmottlemosaicvirus，CGMMV），烟草花叶病毒属（Tobamovirus），是我国重要的农业检疫性有害生物[1]。2011年，浙江省温岭市在西瓜上首次发生CGMMV危害，发病面积100.7hm2，直接经济损失216.0万元[2]。由于CGMMV危害性大，国外国内对该病害的发生规律和影响因素进行了大量的研究，有人研究认为，CGMMV寄主范围狭窄，自然侵染主要是黄瓜、西瓜等葫芦科植物，人工接种可侵染藜科的苋色藜（Chenopodiumamaranticolor）、茄科的蔓陀罗（Daturastramonium）和玄参科的蓝猪耳（Toreniafournieri）[3-4]。对于CGMMV在自然条件下侵染葫芦科作物外的其他植物鲜见研究和报道。本研究采集了浙江省温岭市棚栽嫁接西瓜CGMMV发病田块内自然生长的农田杂草，观察症状，通过酶联免疫双抗体夹心（DAS-ELISA）方法检测，明确棚栽西瓜田杂草的染毒性，为黄瓜绿斑驳花叶病毒病的综合防治提供科学依据。
1材料与方法
1.1采集地概况
于2015年，在浙江省温岭市（121°0950″～121°440″E，28°1245″～28°3202″N）辖区毛竹搭建的塑料大棚，棚内整理成2条面积相同的种植畦，施足基肥覆盖地膜后移栽定植嫁接西瓜苗[砧木（砧木品种：京研牌京欣砧，北京京研益农科技发展中心生产；神通力，辽宁大连中裕种业有限公司生产）、接穗（西瓜品种：天山牌早佳8424，新疆哈密瓜种业公司生产；好利得牌小兰，厦门好利得种苗公司生产）的培育和嫁接苗管理均在该市所属的育苗场进行；顶接法嫁接[5]，采集嫁接西瓜植株发生CGMMV大棚内各种农田杂草，采集地基本情况详见表1：①嫁接西瓜苗人工接种CGMMV诱发地块，横峰街道后洋郑村（该市农作物病虫观测场内），在瓜苗移栽后5d、20d2次人工剪叶接种诱发，保证种植地发病。接种方法：先用剪刀剪除嫁接西瓜苗顶叶或倒2叶片约半张形成伤口，然后在毒源（剪取的2014年棚栽嫁接西瓜病株藤蔓用西贝乐牌榨汁机榨成汁液，保存在-20℃的冰柜内，使用时原汁液经室内自然解冻汁]液中浸渍，使伤口粘满汁液。采集前嫁接西瓜除了适量浇（灌）水外，不施（追）肥料、不除草、不使用农药防治病虫害等影响CGMMV发生扩展的田间管理。②嫁接西瓜自然发病地，箬横镇团结村、长塘村和滨海镇永胜村、永进村嫁接西瓜CGMMV发病种植户各1户，在嫁接西瓜苗移栽定植后，根据生长需要，正常浇（灌）水、施（追）肥料、除草、喷施农药防治病虫害以及整枝打顶、人工授粉、摘瓜等田间管理。
1.2采集与鉴定
在嫁接西瓜CGMMV发病大棚内的种植畦上，杂草以株为单位，对地膜边缘、沟边、地膜破损处生长的杂草，先拍照，观察形态变化，再取样；株型小的杂草直接采集全株；株型大或较大的杂草，用75%乙醇擦拭消毒后的普通剪刀剪取带叶片的茎秆（藤蔓）1～2条；然后装入装样袋，标记、编号；每剪取1个样品，剪刀用75%乙醇擦拭多遍消毒1次，避免取样时样品间相互污染CGMMV。采集的样品带回检测[6]；暂时不能检测的样品保存在-20℃的冰柜（冰箱）内，检测时取出，并将样品自然解冻后检测。
杂草种类识别参照文献[7-8]。
1.3检测
病毒检测采用酶联免疫双抗体夹心法（DAS-ELISA）[9]，病毒检测试剂盒购自美国安德珍（Adgen）生物公司，为96孔酶联板。
2结果与分析
2.1杂草染毒性
经对该市横峰街道后洋郑村和滨海镇永胜村、永进村以及箬横镇长塘村、团结村5个嫁接西瓜种植户CGMMV发病地采集的禾本科（Gramineae）看麦娘（A.aequalis）、莎草科（Cyperaceae）碎米莎草（C.iria）等18科39种杂草82个样品进行DAS-ELISA检测后汇总，结果除了永胜村病地上的蒲公英（T.mongolicum）、臭荠（C.didymus）和团结村病地上的葡茎通泉草（M.miquelii）、陌上菜（L.procumbens）外，其他37种杂草78个样品均呈阳性，即染病，杂草种类染病率94.8%，样品染病率95.1%，其中人工接种诱发染病发病地田间杂草染病种类最多，计15科33种，全部呈阳性，染病率达100%；而自然染病发病地，滨海镇永胜村、永进村以及箬横镇长塘村、团结村杂草种类分别为10科17种、8科14种和9科15种、2科3种，染病率则为88.2%、100%和86.7%、100%（表2），平均为93.72%。图1是横峰街道后洋郑村31种杂草在酶联板上的显色程度与对照的比较，杂草显色与对照试剂无异。说明棚栽嫁接西瓜CGMMV发病种植地上自然生长的杂草也会感染CGMMV，并且染病率极高。
2.2症状表现
在染病的杂草中，经形态比对，龙葵（S.nigrum）、雀舌草（S.alsine）、牛繁缕（M.aquaticum）、小飞蓬（C.canadensis）、黄花蒿（A.annua）、野茼蒿（C.crepidioides）、苦苣菜（S.oleraceus）、香薷（E.ciliata）、空心莲子草（A.Philoxeroides）、紫云英（A.sinicus）、酸模叶蓼（P.lapathifolium）、丁香蓼（L.prostrata）等12种杂草有疑似CGMMV症状，集中在人工接种诱发地块，疑似症状比较明显的有：龙葵（S.nigrumL.）、雀舌草（S.alsine）、牛繁缕（M.aquaticum）、小飞蓬（C.canadensis）和黄花蒿（A.annua）等5种，其中牛繁缕表现症状最早，叶片有黄绿斑驳或褪绿、皱缩严重，后期逐渐枯萎（图2）。
3小结与讨论
农田杂草种类繁多[7，10-11]，一般条件下农田杂草都可以在棚栽嫁接西瓜地上自然发生和生长。棚栽嫁接西瓜地上杂草感染或携带CGMMV，无论其在侵染环节的作用如何，均大大增加了CGMMV在棚栽嫁接西瓜上的传播和发病能力，因此，在开展杂草CGMMV研究的基础上，加强棚栽嫁接西瓜除草工作，切斷再侵染途径，保障棚栽嫁接西瓜的正常健康生长。
参考文献：
[1]中华人民共和国农业部公告（第788号）[J].中国植保导刊，2007，27（3）：11.
[2]李云明，施海萍，顾云琴.温岭黄瓜绿斑驳花叶病毒病防控技术推广与应用[J].中国植保导刊，2014，34（12）：60-61.
[3]陈京，李明福.新入侵的有害生物——黄瓜绿斑驳花叶病毒[J].植物检疫，2007，21（2）：94-96.
[4]季良.植物种传病毒与检疫[M].北京：中国农业出版社，1995：152-154.
[5]别之龙.西瓜甜瓜嫁接育苗安全生产技术规程[J].中国瓜菜，2012，25（1）：49-52.
[6]DB21/T1749.3—2009黄瓜绿斑驳花叶病毒检验检测技术规程[S].辽宁：辽宁省质量技术监督局，2009.
[7]王枝荣.中国农田杂草原色图谱[M].北京：农业出版社，1990.
[8]湖南农科院植物教研组.农田杂草[M].北京：农业出版社，1974.
[9]李艳敏，藏宪朋，王荣洲，等.2012—2013年浙江省黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测及防控[J].浙江农业科学，2013（11）：1409-1410，1465.
[10]左娇，王雪君，郭运玲，等.南繁区转基因水稻田杂草种类调查[J].杂草科学，2014，32（4）：40-44.
[11]肖晓华，刘春，吴洪华，等.重庆市秀山县农田杂草种类调查[J].杂草科学，2014，32（4）：32-39.
