叶玉娟 宁丙乾 陈艳荣
摘 要：该文阐述了本科院校遗传学实验课程中难度较大的《果蝇唾腺染色体的制备及观察》实验，从培养材料起，对唾腺的剥离、解离、染色、压片，再到观察唾腺染色体的实验步骤和注意事项都进行了详细的叙述。该实验对本科院校生物学专业学生具有非常重要的意义，不仅能帮助学生掌握剥离果蝇幼虫唾腺的关键技术，也使学生更直观地了解到多线染色体的形态特征和遗传学特征。
关键词：唾腺染色体 染色 实验综述
中图分类号：Q243 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2020）06（b）-0204-02
Abstract： This paper describes the experiment of "preparation and observation of salivary gland chromosome of Drosophila melanogaster"， which is very difficult in the course of genetics experiment in undergraduate colleges. From the point of culture materials， the experiment steps and precautions of salivary gland chromosome observation are described in detail. This experiment is of great significance to biology students of undergraduate colleges. It can not only help students master the key technology of stripping salivary gland of Drosophila larvae， but also help students understand the morphological and genetic characteristics of multiline chromosomes more directly.
Key Words： Salivary gland chromosome; Dyeing; Experimental overview
1 實验目的
（1）掌握剥离果蝇幼虫唾腺的技术，并学习制作果蝇唾腺染色体标本的方法。
（2）观察了解果蝇唾腺染色体（多线染色体）的特征。
2 实验原理
果蝇属双翅目昆虫，其幼虫期具有很大的唾腺细胞，其中的染色体叫作唾腺染色体。唾腺染色体比一般普通的染色体大很多，因而又叫作巨大染色体。
果蝇唾腺染色体经过多次自我复制，但是却不分开，就形成了有众多拷贝的染色体丝，约1000～4000拷贝，所以又被称为多线染色体。
果蝇唾腺染色体具有很多重要特征，经过特殊染色后，可观察到一些横纹，这些横纹深浅、密疏都不一样，但是其位置和数目往往是不变的，这是果蝇的种的特征。
该实验对果蝇唾腺染色体的观察具有非常重要的意义。经过前人的反复研究观察，发现果蝇唾腺染色体可以成为细胞和分子遗传学研究的典型模式材料。为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等，提供了非常好的研究材料。果蝇唾腺染色体可以用来解释一些特殊的遗传现象[2]。因为染色体如果有缺失、重复、倒位、易位等现象，就很容易在唾腺染色体上识别出来。果蝇唾腺多线染色体不但是研究复制[3，4]的好材料、也是研究转录[5]的好材料。
3 实验材料
黑腹果蝇三龄幼虫（选择行动较迟缓、身体较肥大，且爬上培养瓶管壁的三龄幼虫）。
三龄幼虫饲养时要注意以下几点：（1）培养基要富含营养。培养基的配制按果蝇培养基配方。培养瓶中出现一龄幼虫后，每天在培养基表面滴入用酵母酵母配成的水溶液（2%～4%），薄薄地铺在培养基表面即可，用以补充幼虫的食物;在二龄和三龄幼虫期滴加酵母液（10%）。（2）虫口密度要小。在培养瓶中接种10对左右亲蝇，24h后清除亲蝇，降低虫口密度，促进幼虫发育。（3）低温培养。尽量在18℃～20℃的低温下培养为宜。
4 试剂和器材
实验试剂：生理盐水（0.9%NaCI溶液）;蒸馏水;1mol/L
HCl;45%乙酸;改良苯酚品红染液。
实验器材：显微镜、解剖镜、解剖针、镊子、载玻片、盖玻片、滤纸、小毛笔。
5 实验步骤
5.1 剥离唾腺
选材：应选择行动较迟缓、身体较肥大，且爬上培养瓶管壁的三龄幼虫。这种幼虫染色体条带清晰。
剥离：载玻片清洗干净，滴一滴生理盐水，将选好的实验材料-黑腹果蝇三龄幼虫，置于载玻片上的生理盐水中。然后将载玻片置于解剖镜下，在解剖镜下进行剥离。取解剖针2根，两手各握1根，实验要取得的果蝇唾腺位于虫体前1/3～1/4处。操作如下：一手持解剖针压住虫体后端1/3处，固定幼虫，另一手的解剖针则按住幼虫头部，适当用力向外拉，把头部从身体拉开的同时，果蝇唾腺便随之被拉出，仔细辨认，找到透明棒状结构的唾腺。用解剖针剥去唾腺以外的其他部分，并小心去除唾腺上的脂肪。
5.2 解离和染色
解离：在剥离好的唾腺上滴加1mol/L HCl1滴，解离2～3min，用以分散染色体。解离完毕后用绿植吸去HCl溶液。
水洗：用水清洗2～3次，每次1～2min。用滤纸小心吸去多余的蒸馏水。
