肖非
摘 要
结核病属于重要传染疾病，其能够对个体健康产生严重的不良影响，是我国发病率和死亡率最高的传染病，青壮年是主要的患病人群，以农村地区为主，而结核病确诊的主要依据为实验室检查，其中痰涂片染色法因操作简单、价格便宜，在我国得到广泛的使用。但萋尼染色加热法需加温处理过于烦琐，冷染法简化了其过程。
关键词
结核实验室诊断;冷染法;实验教学
中图分类号： R521 文献标识码： A
DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457 . 2020 . 06 . 66
结核病属于重要传染疾病，其对个体健康产生严重的不良影响，而且致死率极高。在世界范围内，通过分析相关报告中给出的数据等内容可以了解到，结核是我国发病率和死亡率最高的传染病，最主要的患病人群为青壮年及营养不良者，以农村地区为主，往往会对经济发展产生阻碍。针对如何预防和治疗结核病，国内有关方面不断展开深入研究，但发病率并未得到有效的控制，导致此状况产生的原因较多，具体包括结核杆菌变异等，而结核病确诊的主要依据为实验室检查，其中痰涂片染色法因操作简单、价格简单，在我国得到广泛的使用。但萋尼染色加热法需加温处理过于烦琐，冷染法简化了其过程。本实验对两种方法分成A.B.C三组进行比较，介绍如下：
1 材料与方法
1.1 模拟标本
有效日期内卡介苗（防疫部门赠送）1支加入1ml无菌蒸馏水溶解混匀，加入健康唾液标本制成混合痰标本，以模拟病人痰液标本。
1.2 试剂
（1）苯酚复红染液是由A、B两种溶液按照一定比例混合后得到的。A溶液就是在100ml浓度95%的乙醇中溶解3g碱性复古红制剂。B溶液就是在100ml蒸馏水中溶解0.5kg苯酚。A、B两种溶液分别取10ml和90ml，混合后即得到所需染液。（2）3%盐酸乙醇液：将97ml乙醇（浓度95%）与3ml浓盐酸进行混合即可。（3）亚甲蓝液亚甲蓝乙醇饱和溶液：向100ml乙醇（浓度95%）中投入2g亚甲蓝，将二者混合均匀后取30ml混合溶液备用。（4）10%氢氧化钾：0.1ml。（5）蒸馏水：100ml。
1.3 方法
1.3.1 冷染法
（1）直接涂片法制作的涂片尺寸为20mm×15mm，且应具有一定厚度，并使用火焰对干燥后的涂片进行固定。A组水洗5min，使用苯酚复红染液，在脱色时使用3%盐酸酒精，随后进行1min的复染，使用亚甲蓝溶液，水洗，最后镜检经过干燥处理的涂片;B组除染色时间增加到20min外，其余操作均与A组相同。
1.3.2 加温染色法
C组按照萋-尼染色原法将涂片固定后滴加苯酚复红染液盖满痰膜，弱火加温染色5min，水洗用脱色液进行脱色，加亚甲蓝进行复染1min，水洗干燥后镜检。
2 结果
抗酸染色阳性菌在镜检中的样子为略带卷曲或细长，呈红色。其余的细菌或细胞均被染成蓝色。在油镜在观察100个视眼，A组与C组比较染色时间相同但C组进行加热处理，C组视眼更加清晰，结构更加明显。B组与C组相比，B组加长了染色时间，100个视眼下相比，冷染法红色杆菌菌体更为清晰，对比更为明显。但检测的阳性率相同无任何优劣之分。通过对比可知干燥20分钟和烘干的效果是一致的。
3 讨论
结核分枝杆菌细胞壁当中含有大量的脂质，大多都汇聚于肽聚糖之外，这也直接导致分枝杆菌不会着色，必须要经过加热、延长染色时间才能够达到这一目的。常规而言，分枝杆菌着色之后则无法立即被脱色，这也被称作为抗酸染色。在上实验课时候时，学生抗酸染色主要会直接运用传统的姜-尼抗酸染色加热法来展开实验，其所表现出来的缺点主要如下：（1）酒精灯在加热过程当中，整体的操作时间较长，掌握起来也更加吃力;（2）在加热过程当中，染液容易干涸;（3）在加热过程当中，石炭酸蒸发出来会给人体造成巨大损害。此次實验操作使用的是萋尼染色冷染色法，可取得良好的染色效果而且能保持染液的稳定。通过运用卡介苗水溶液来直接取代结核菌痰液阳性标本，改良后的抗酸染液染色的实验方法能够促使其发生改变，菌体形态、与染色均无明显差异;拥有染色效果优秀、标本出处容易、操纵简易和安全无污染等特征。这一方面能够很好避免结核排菌阳性病人的痰液受到污染，此举能够更好地将抗酸染色实验教学中的各类要求全部都予以满足。基于当前的实验结果显示情况看来，利用萋尼染色冷染法能够让结核杆菌呈现出亮红色，菌体也会变得更加清晰，细菌的颜色与背景着色对比也会更加明显。面对于这种情况，镜检人员在观察过程当中也会更加容易，所以，一旦抗酸染色有所改良，则能够直接运用于临床标本的结核分枝杆菌染色镜检，结核菌的阳性检出率也能够陡然提升。
参考文献
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