徐国波 田秀秀 郑华
【摘 要】目的：评价金银花、罗汉果、玄参、桔梗、诃子、甘草复合提取物抗炎活性。方法：分别以0.67 g/kg·bw/d，1.33 g/kg·bw/d和3.99g/kg·bw/d剂量连续灌胃大、小鼠30 d后，通过大鼠棉球植入试验、大鼠足趾肿胀试验以及小鼠耳肿胀试验，评价其清咽功能。结果：1.33 g/kg·bw/d和3.99 g/kg·bw/d组肉芽肿净重量低于对照组；3.99 g/kg·bw/d组耳廓肿胀率低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：金银花、罗汉果、玄参、桔梗、诃子、甘草复合提取物，具有清咽功能。
【关键词】金银花；罗汉果；玄参；桔梗；诃子；甘草；抗炎
中图分类号： R284 文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2017）20-0003-002
Study on the Effect of Six Kinds of Compound Extracts on Hibiscus
XU Guo-bo1 TIAN Xiu-xiu2 ZHENG Hua2
（1.Guangzhou Wanglaoji Health Industry Co.，Ltd.，Guangzhou Guangdong 510642，China；
2.South China Agricultural University，Guangzhou Guangdong 510642，China）
【Abstract】Objective：To evaluate the anti-inflammatory activity of honeysuckle，Mangosteen，Scrophulariaceae，Campanulaceae， Myrobalan and Radix Glycyrrhizae.Methods：After 30 days，the rats were injected with 0.67g/kg · bw/d，1.33g/kg ·bw/d and 3.99 g /kg·bw/d，respectively.，Rat toe swelling test and mouse ear swelling test， to evaluate its pharyngeal function.Results：The weight of granuloma was 1.33g/kg·bw /d and3.99g/kg ·bw/d，and the scalp swelling rate in 3.99g/kg·bw/d group was lower than that in control group（P<0.05）.Conclusion：honeysuckle，Mangosteen， Scrophulariaceae，Campanulaceae，Myrobalan，Glycyrrhiza compound extract， with pharyngeal function.
【Key words】Honeysuckle；Luohan fruit；Scrophulariaceae；Campanulaceae；Myrobalan；Licorice
咽炎是临床上的常见病、多发病，指咽部粘膜慢性炎症，以咽部发干、咽痛、有异物感等为主要临床表现。金银花中绿原酸、异绿原酸是主要有效成分，罗汉果含有维生素C、甜甙等，均有清热解毒、清咽利喉作用[1-3]；玄参清热凉血，泻火解毒[4，5]；桔梗具有宣肺利咽[6，7]；诃子富含鞣质，其中没食子酸为其有效成分之一，敛肺利咽[8]；甘草清热解毒，主含甘草甜素、甘草黄酮和甘草多糖[9]。目前对单一的成分的清咽的功能已有报道，但对以上6种提取物配伍后具有清咽功能的研究未见报道。因此，本实验根据国食药监保化[2012]107 号文件中清咽功能动物试验的相关要求，从大鼠肉芽肿、大鼠足趾肿胀率、小鼠耳肿胀 3 个方面研究金银花、罗汉果、玄参、桔梗、诃子、甘草复合提取物对大、小鼠清咽功能的影响，为清咽功能的保健食品开发提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 样品
金银花、罗汉果、玄参、桔梗、诃子、甘草复合提取物（折合金银花生药量4g/d、罗汉果生药量3.2g/d、玄参生药量2.8g/d、桔梗生药量2g/d、诃子生药量1.33g/d、甘草生药量0.64g/d），推荐成人日服用量为8.0 g，常温密闭置阴凉、避光、干燥处保存。试验时样品均用蒸馏水配制和稀释。
1.2 动物
SPF级SD健康雄性大鼠80只，SPF级F1代健康雄性小鼠40只，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK（沪）2013-0016，合格證编号：2008001641938、2008001641936。大鼠各平行实验组初始体重范围为150～173g。小鼠各平行实验组初始体重范围为19.2～21.8g。
试验动物在温度为20～25℃、相对湿度为40%～70%的本中心屏障系统中饲养。试验动物使用许可号：SYXK（苏）2012-0041。辐照灭菌饲料由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司提供，批文文号：苏饲审（2009）05032。
1.3 仪器与试剂
电子天平，北京赛多利斯科学仪器有限公司；3-18k高速冷冻离心机，德国Sigma公司；Elx800酶标仪，美国Bio Tek公司；3111型CO2培养箱，美国Thermo Fisher公司；SW-CJ-2FD型净化工作台，苏州净化设备有限公司；YLS-7C足趾容积测量仪：北京众实迪创科技发展有限责任公司。
葡聚糖T-40，Baomanbio，购自上海宝曼生物科技有限公司。endprint
1.4 方法
大鼠适应环境3天，按体重随机分为I、II两个大组，每个大组分为4个剂量组，每个剂量组10只大鼠。I组大鼠进行棉球植入实验，II组大鼠进行足趾肿胀实验。
小鼠适应环境3天，按体重随机分为4个剂量组，每个剂量组10只小鼠。进行小鼠耳肿胀实验。
金银花、罗汉果、玄参、桔梗、诃子、甘草复合提取物推荐成人日服用量为8.0 g（按60kg体重计），设低、中、高三个剂量组即0.67 g/kg·bw/d，1.33 g/kg·bw/d和3.99 g/kg·bw/d，相当于人日推荐剂量的5倍、10倍、30倍，另设0 g/kg·bw/d对照组以无菌水代替受试物、受试样品用无菌水配制，低、中、高剂量配置浓度为67mg/mL、133 mg/mL、399 mg/mL，按1.0mL/100g·bw灌胃。经口每日一次给予大、小鼠相应浓度的受试样品，连续灌胃一个月后进行各项指标测定。
1.4.1 大鼠棉球植入实验
1.4.1.1 棉球的处理
将脱脂棉球制成约20mg紧致的小棉球，经高压杀菌后，置于恒温干燥箱60℃干燥3h，取出无菌条件下称重，干燥保存，备用。
1.4.1.2 肉芽肿的形成和测定
實验结束前8天取I组大鼠，用脱毛器去大鼠两侧腹股沟处的毛，乙醚前麻醉大鼠，碘伏消毒，在无菌条件下切开大鼠两侧腹股沟皮肤，植入备用的棉球，缝合切合，连续给予受试物。试验结束当天，给受试物1h后，断颈处死大鼠，在原缝合处剪开皮肤，剥离并取出棉球肉芽组织，置于已称重的洁净平皿中，恒温干燥箱60℃开盖干燥1h后称重。计算肉芽肿净量。
肉芽肿净量（mg）=干燥后棉球肉芽肿重量-原棉球重量
实验组与溶剂对照组比较，肉芽肿净量明显下降，差异有显著性，可判定该受试样品大鼠棉球植入实验结果阳性。
1.4.2 大鼠足趾肿胀实验
1.4.2.1 致炎剂配制
用无菌蒸馏水配制浓度为1%的葡聚糖T-40，备用。
1.4.2.2 足趾肿胀及测定
实验结束当天取II组大鼠再次给受试样品一次，1h后，用足趾容积测量仪测量各组大鼠右后足趾的容积，作为0h足趾容积。然后在大鼠右后足趾皮下注入1%葡聚糖T-40 0.1mL/只，分别于1、2、4、6h测定大鼠足趾的容积，同一部位测量3次，取平均值。以不同时间所测足趾容积与致炎剂作用前的足趾容积之差为肿胀值，计算各个时间段的足趾肿胀率。
肿胀率=肿胀值/致炎前足趾容积率*100%
实验组与溶剂对照组比较，任一时间点刺激前后足趾容积容积率明显减少，差异有显著性，可判定该受试样品大鼠足趾肿胀实验结果阳性。
1.4.3 小鼠耳肿胀实验
取小鼠，汲取二甲苯20uL，滴加在小鼠右耳外侧面耳廓的中央，让其自由扩散，30min后，将小鼠脱颈椎处死，剪下双耳，用9mm直径打孔器在两耳相同部位打下耳片并称重，以两耳重量之差为耳廓肿胀值，计算耳廓肿胀率。
耳廓肿胀率（%）=耳廓肿胀值/对照耳片重量*100%
实验组与溶剂对照组比较，耳廓肿胀率明显减少，差异有显著性，可判定该受试样品小鼠耳肿胀实验结果阳性。
1.5 统计学处理方法
用SPSS统计软件对实验数据进行统计处理。
1.6 结果判定
大鼠棉球植入实验结果阳性，同时大鼠足趾肿胀实验或小鼠耳肿胀实验结果任意一项阳性，可判定该受试样品具有清咽功能。
2 结果
2.1 对大鼠肉芽肿形成的影响
由表1可见，1.33 g/kg·bw/d和3.99 g/kg·bw/d组肉芽肿净量低于0 g/kg·bw/d组，差异有统计学意义（P<0.05），即差异显著。
表1 金银花等复合提取物对大鼠肉芽肿形成的影响（`x±SD ）
2.2 对大鼠足趾肿胀情况的影响
由表2可见，0.67 g/kg·bw/d、1.33 g/kg·bw/d和3.99 g/kg·bw/d组各时间点的大鼠足趾肿胀率与0 g/kg·bw/d组比较，差异均无统计学意义（P>0.05），即差异不显著。
表2金银花等复合提取物对大鼠足趾肿胀情况的影响（`x±SD ）
续表2金银花等复合提取物对大鼠足趾肿胀情况的影响（`x±SD）
2.3 对小鼠耳肿胀实验的影响
由表3可见，3.99g/kg·bw/d组耳廓肿胀率低于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义（下转第23页）（上接第4页）（P<0.05），即差异显著。
表3 金银花等复合提取物对小鼠耳肿胀情况的影响（`x±SD）
3 讨论
中医学认为，咽喉乃十二经脉循行和聚汇的要冲，通过经络与五脏六腑相联系。本研究将不同剂量的金银花、罗汉果、玄参、桔梗、诃子、甘草复合提取物连续灌胃大、小鼠30 d后，并大鼠棉球植入试验、大鼠足趾肿胀试验以及小鼠耳肿胀试验等方面进行研究。
研究表明，罗汉果、玄参、桔梗、甘草等提取物对大小鼠棉球肉芽肿模型有效，结果阳性，具有抗炎的效果，本研究大鼠棉球植入实验结果为阳性，大鼠足趾肿胀实验结果为阴性，小鼠耳肿胀实验结果为阳性。依据国食药监保化[2012]107中清咽功能试验的结果判断，金银花、罗汉果、玄参、桔梗、诃子、甘草复合提取物，具有清咽功能。
【参考文献】
[1]孙涛，孙付军.金银花胶囊配合等离子消融治疗慢性咽炎药理分析及疗效观察[J].中国医药导报，2009，6（22）：215-216.
[2]陈瑶，范小兵，王永祥，等.罗汉果甜苷的止咳祛痰作用研究[J].中国食品添加剂，2005：41-59.
[3]金春花，姜秀莲，洪铁，等.罗汉果咽喉片的药理研究[J].中药材，1997，20（11）：574-577.
[4]王强，李兴平，白筱璐，等.玄参的抗炎解热作用研究[J].中药药理与临床，2011，27（3）：76-78.
[5]曾华武，李医明，贺祥，等.玄参提取物的抗炎和抗氧活性[J].第二军医大学学报，1999，20（9）：614-616.
[6]金锡九，张敏，聂兵.桔梗水提取物的急性和蓄积毒性试验[J].饲料工业，2007，28（20）：33-34.
[7]孙荏苒，张满云，陈勤.桔梗皂苷胶囊抗炎止咳平喘作用研究[J].中药药理与临床，2010，26（4）：27-29.
[8]林励，徐鸿华，王乃规，等.不同品种及采收期诃子质量研究[J].中国中药杂志，1997，22（3）：149-151.
[9]刘彬，齐云，宋杨，等.甘草皂苷与桔梗皂苷合用的时间协同研究[J].中国实验方剂学杂志，2007，13（4）：28-31.endprint
